流動相配制：根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇合適的流動相（如甲醇 - 水體系、乙腈 - 緩沖鹽溶液），使用高純度試劑和超純水配制，并通過 0.45μm 濾膜過濾，去除顆粒雜質(zhì)，防止堵塞色譜柱與管路。配制后需進(jìn)行超聲脫氣 15 - 30 分鐘，避免氣泡進(jìn)入系統(tǒng)影響基線穩(wěn)定性。
樣品處理：確保樣品溶解，使用 0.22μm 或 0.45μm 濾膜過濾，去除不溶物；對于復(fù)雜基質(zhì)樣品（如生物組織提取物），需進(jìn)行萃取、凈化等前處理，防止雜質(zhì)污染色譜柱與檢測器。
儀器檢查：確認(rèn)輸液泵、進(jìn)樣器、檢測器等部件連接正常；檢查儲液瓶中流動相余量充足，廢液瓶空間足夠；查看色譜柱標(biāo)簽信息，確認(rèn)其規(guī)格（如 C18、5μm、250×4.6mm）與實(shí)驗(yàn)需求匹配，并確保柱溫箱溫度設(shè)定范圍符合色譜柱耐受條件。
系統(tǒng)沖洗：開機(jī)后，使用低流速（如 0.3 - 0.5mL/min）的初始流動相沖洗系統(tǒng) 15 - 30 分鐘，排除管路中的氣泡與殘留雜質(zhì)；若更換流動相體系（如從水相切換至有機(jī)相），需使用中間過渡溶劑（如異丙醇）逐步置換，防止鹽析或相分離。
梯度洗脫程序設(shè)定：根據(jù)樣品特性，在工作站軟件中設(shè)置流動相比例變化梯度。例如，反相色譜分離多組分化合物時(shí)，可設(shè)定初始有機(jī)相比例為 20%，在 20 分鐘內(nèi)線性升至 80%，以實(shí)現(xiàn)不同極性組分的有效分離。
流速與溫度調(diào)節(jié)：一般情況下，流速設(shè)置為 0.8 - 1.2mL/min；柱溫箱溫度設(shè)定為 25 - 40℃，提高分離效率并降低基線噪音。
檢測器參數(shù)調(diào)整：若使用紫外 - 可見分光檢測器（UV - Vis），需設(shè)定檢測波長（如檢測苯環(huán)類化合物常用 254nm）；熒光檢測器（FLD）則需設(shè)置激發(fā)波長與發(fā)射波長；質(zhì)譜檢測器（MS）需優(yōu)化離子源溫度、噴霧電壓等參數(shù)。
進(jìn)樣操作：手動進(jìn)樣時(shí)，使用專用微量注射器吸取適量樣品（通常為 1 - 10μL），通過六通閥進(jìn)樣；自動進(jìn)樣器則需在軟件中設(shè)置進(jìn)樣體積、進(jìn)樣序列及樣品盤位置，確保樣品瓶編號與軟件設(shè)置一致。
運(yùn)行監(jiān)測：進(jìn)樣后，實(shí)時(shí)觀察色譜圖基線穩(wěn)定性、峰形及保留時(shí)間。若基線波動較大或出現(xiàn)鬼峰，需排查流動相污染、色譜柱殘留或檢測器故障等問題；若峰形拖尾或分叉，可能需調(diào)整流動相 pH 值、更換色譜柱或優(yōu)化流速。
重復(fù)測定：為保證數(shù)據(jù)可靠性，每個(gè)樣品建議重復(fù)測定 3 次，計(jì)算峰面積或峰高的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD），通常要求 RSD≤2%。
峰識別與積分：使用工作站軟件自動識別色譜峰，調(diào)整積分參數(shù)（如斜率靈敏度、峰寬閾值）確保積分結(jié)果準(zhǔn)確；對于重疊峰，可采用手動積分或優(yōu)化分離條件重新測定。
定性定量分析：通過比較樣品峰保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)保留時(shí)間進(jìn)行定性；采用外標(biāo)法、內(nèi)標(biāo)法或標(biāo)準(zhǔn)加入法，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品濃度。
報(bào)告生成：導(dǎo)出分析數(shù)據(jù)，生成包含樣品信息、分析條件、色譜圖及結(jié)果數(shù)據(jù)的檢測報(bào)告，必要時(shí)附原始數(shù)據(jù)與譜圖。
日常維護(hù)：分析結(jié)束后，使用高比例有機(jī)相（如 90% 甲醇 - 水）沖洗色譜柱 30 - 60 分鐘，去除殘留樣品與雜質(zhì)；關(guān)閉儀器前，將流速降至 0，依次關(guān)閉檢測器、輸液泵與工作站軟件。
定期維護(hù)：每月更換流動相管路過濾白頭，防止堵塞；每半年對輸液泵密封圈、進(jìn)樣器針頭等易損部件進(jìn)行檢查與更換；定期使用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)驗(yàn)證儀器性能（如保留時(shí)間重復(fù)性、峰面積重復(fù)性），確保儀器處于最佳工作狀態(tài)。
液相色譜儀的規(guī)范使用需兼顧操作細(xì)節(jié)與理論知識。通過嚴(yán)格遵循上述流程，并結(jié)合具體實(shí)驗(yàn)需求靈活調(diào)整參數(shù)，既能獲得可靠的分析結(jié)果，也能有效延長儀器使用壽命，充分發(fā)揮其在科研與檢測領(lǐng)域的價(jià)值。
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